Aislamiento de ADN de calidad para la amplificación al azar de adn polimórfico de mango
Con la finalidad de caracterizar los distintos genotipos del Banco de Germoplasma de mango del Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias (CENIAP) a través de RAPD, fueron ajustadas las condiciones para la extracción de ADN nuclear a partir de tejido foliar. Se realizaron pruebas para calibrar el buffer de extracción, comparándose 4 soluciones de lisis y las condiciones iniciales de incubación del tejido macerado. De igual manera se hicieron pruebas factoriales de niveles de pesos de tejido foliar y volumen de buffer de lisis y las condiciones de precipitación del ADN, lavado del sedimento final y efecto de la liofilización en la resuspensión del sedimento de ADN. De los 4 protocolos distintos de extracción, se obtuvo una mayor cantidad de ADN con la metodología desarrollada por Doyle y Doyle. Los mejores resultados se obtuvieron macerando 250 mg de tejido foliar joven en 900 µl de tampón CTAB 2X con Tris Base calentado a 60 °C, e incubando el macerado por 1 hora a la misma temperatura. El almacenamiento de las muestras a -20 °C hasta el día siguiente mejoró la precipitación del ADN al agregar isopropanol 98% frío. La incubación del ADN a 37 °C con la solución de lavado (etanol 70%) permitió obtener sedimentos blancos. Finalmente la resuspensión del sedimento de ADN se mejora al liofilizar los tejidos a -50 °C durante 3 h. La metodología probó ser eficiente con las variedades de mango, Mangifera indica L., estudiadas, permitiendo extraer ADN genómico en concentraciones superiores a 350 ng/µl en todos los casos.
| Main Authors: | , |
|---|---|
| Format: | Digital revista |
| Language: | Spanish / Castilian |
| Published: |
Instituto Nacional de Investigaciones Agrícolas INIA de Venezuela
2007
|
| Online Access: | http://ve.scielo.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0002-192X2007000400004 |
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| Summary: | Con la finalidad de caracterizar los distintos genotipos del Banco de Germoplasma de mango del Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias (CENIAP) a través de RAPD, fueron ajustadas las condiciones para la extracción de ADN nuclear a partir de tejido foliar. Se realizaron pruebas para calibrar el buffer de extracción, comparándose 4 soluciones de lisis y las condiciones iniciales de incubación del tejido macerado. De igual manera se hicieron pruebas factoriales de niveles de pesos de tejido foliar y volumen de buffer de lisis y las condiciones de precipitación del ADN, lavado del sedimento final y efecto de la liofilización en la resuspensión del sedimento de ADN. De los 4 protocolos distintos de extracción, se obtuvo una mayor cantidad de ADN con la metodología desarrollada por Doyle y Doyle. Los mejores resultados se obtuvieron macerando 250 mg de tejido foliar joven en 900 µl de tampón CTAB 2X con Tris Base calentado a 60 °C, e incubando el macerado por 1 hora a la misma temperatura. El almacenamiento de las muestras a -20 °C hasta el día siguiente mejoró la precipitación del ADN al agregar isopropanol 98% frío. La incubación del ADN a 37 °C con la solución de lavado (etanol 70%) permitió obtener sedimentos blancos. Finalmente la resuspensión del sedimento de ADN se mejora al liofilizar los tejidos a -50 °C durante 3 h. La metodología probó ser eficiente con las variedades de mango, Mangifera indica L., estudiadas, permitiendo extraer ADN genómico en concentraciones superiores a 350 ng/µl en todos los casos. |
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