Caracterização do processo de morte celular na interação Theobroma cacao / Crinipellis perniciosa
A morte celular programada (PCD) é uma parte intrínseca do ciclo de vida de organismos multicelulares, incluindo plantas e animais. O Processo de PCD está associado a mudanças morfológicas e bioquimicas, geneticamente crontoladas, e tem sido muito melhor caracterizado em animais. Em plantas, este evento encontra-se relacionado a senescência, desenvolvimento de elementos traqueais e resposta a patógenos. A expressão acentuada de enzimas como lipases, cisteinas proteases, superóxido dismutase, peroxidase também está relacionada ao processo de morte celular. O desenvolvimento da vassoura-de-bruxa, doença causada pelo fungo Crinipellis perniciosa, tem provocado inúmeros danos econômicos e sociais à região Sul da Bahia. Durante a infecção, o cacaueiro apresenta uma sintomatologia característica de morte celular, reduzindo a qualidade do produto a ser comercializado e consumido. Este estudo tem por objetivo caracterizar o evento de PCD como resposta a infecção de C. perniciosa no cacaueiro. Com esta finalidade, plãntulas de cacau da variedade susceptível catongo foram inoculadas com esporos de C. perniciosa e meristemas infectados foram coletados em três diferentes estágios de infecção. A confirmação da indução dos sintomas por C. perniciosa foi realizada por meio da análise de RT-PCR do gene do indutor de necrose expresso exclusivamente pelo patógeno. A análise da fragmentação do DNA por meio de técnica de TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end-labeling) foi proferida utilizando a metodologia sugerida por Gavrielli, 1992 com modificações. Meristemas de cacau foram fixados em paraformaldeído 4%, embebidos em parafina e cortados com a utilização de microtomo. A detecção dos fragmentos de DNA foi realizada utilizando-se "In situ Cell Death Detection Kit" (Roche, Mannheim, Germany), sendo os núcleos observados e fotografados em microscópio de fluorescência. A análise de morte celular por TUNEL em meristemas de plantas lenhosas incluidas em parafinas ainda não foi descrita na literatura. Este trabalho também demonstra que o procedimento de inclusão em parafina é uma metodologia eficiente para a análise da fragmentação de DNA em experimentos de TUNEL. Apesar desta análise mostrar a fragmentação do DNA genômico de cacau em plantas infectadas, a formação do marcador observado em células em PCD não foi constatado até o momento na interação cacau/C. perniciosa. Em outras interações patógeno/hospedeiro esta quebra ocorrida no nucleossomo com formação de fragmentos de 180 pb também não tem sido visualizada (Pasqualini et al, 2003). Evidencia-se, portanto, um processo de degradação do DNA do cacaueiro em meristemas ou em folhas em estágios avançados de infecção por C. perniciosa.
| Main Authors: | , , , , , , , , , |
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| Format: | conference_item biblioteca |
| Language: | por |
| Published: |
s.n.
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| Subjects: | H20 - Maladies des plantes, |
| Online Access: | http://agritrop.cirad.fr/525669/ |
| Tags: |
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| Summary: | A morte celular programada (PCD) é uma parte intrínseca do ciclo de vida de organismos multicelulares, incluindo plantas e animais. O Processo de PCD está associado a mudanças morfológicas e bioquimicas, geneticamente crontoladas, e tem sido muito melhor caracterizado em animais. Em plantas, este evento encontra-se relacionado a senescência, desenvolvimento de elementos traqueais e resposta a patógenos. A expressão acentuada de enzimas como lipases, cisteinas proteases, superóxido dismutase, peroxidase também está relacionada ao processo de morte celular. O desenvolvimento da vassoura-de-bruxa, doença causada pelo fungo Crinipellis perniciosa, tem provocado inúmeros danos econômicos e sociais à região Sul da Bahia. Durante a infecção, o cacaueiro apresenta uma sintomatologia característica de morte celular, reduzindo a qualidade do produto a ser comercializado e consumido. Este estudo tem por objetivo caracterizar o evento de PCD como resposta a infecção de C. perniciosa no cacaueiro. Com esta finalidade, plãntulas de cacau da variedade susceptível catongo foram inoculadas com esporos de C. perniciosa e meristemas infectados foram coletados em três diferentes estágios de infecção. A confirmação da indução dos sintomas por C. perniciosa foi realizada por meio da análise de RT-PCR do gene do indutor de necrose expresso exclusivamente pelo patógeno. A análise da fragmentação do DNA por meio de técnica de TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end-labeling) foi proferida utilizando a metodologia sugerida por Gavrielli, 1992 com modificações. Meristemas de cacau foram fixados em paraformaldeído 4%, embebidos em parafina e cortados com a utilização de microtomo. A detecção dos fragmentos de DNA foi realizada utilizando-se "In situ Cell Death Detection Kit" (Roche, Mannheim, Germany), sendo os núcleos observados e fotografados em microscópio de fluorescência. A análise de morte celular por TUNEL em meristemas de plantas lenhosas incluidas em parafinas ainda não foi descrita na literatura. Este trabalho também demonstra que o procedimento de inclusão em parafina é uma metodologia eficiente para a análise da fragmentação de DNA em experimentos de TUNEL. Apesar desta análise mostrar a fragmentação do DNA genômico de cacau em plantas infectadas, a formação do marcador observado em células em PCD não foi constatado até o momento na interação cacau/C. perniciosa. Em outras interações patógeno/hospedeiro esta quebra ocorrida no nucleossomo com formação de fragmentos de 180 pb também não tem sido visualizada (Pasqualini et al, 2003). Evidencia-se, portanto, um processo de degradação do DNA do cacaueiro em meristemas ou em folhas em estágios avançados de infecção por C. perniciosa. |
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